Маловотчиный Житенный Смоленский мужской монастырь был заштатным, то есть не имел содержания от казны. За время существования обители число иноков и послушников монастыря постоянно менялось. Их было обычно от восьми до шестнадцати человек. По материалам за 1724 год, в Житенном монастыре насчитывалось десять монахов, в 1737 году было семь монахов, семь послушников и игумен Тарасий (Валтухов), в 1764 году— 14 человек братии и игумен Василий, в 1817 году— семь монахов и игумен Макарий I, в 1865 году — пять монахов, семь послушников и игумен Арсений, в 1899 году — пять монахов, семь послушников и игумен Василий, в 1903 году — шесть монахов, восемь послушников и игумен (личность не известна), в 1918 году — восемь монахов, два послушника и игумен Иосиф.
В послужных списках о монашествующих и послушниках осташковского Житенного монастыря содержится информация практически обо всех иноках и бельцах (то есть тех, кто только намеревался принять постриг). Это были люди разных сословий и возрастов. Сюда приходили и постригались крестьяне и мещане города Осташкова, Винниц, числились монахи из Великогорья, а также из Тверской, Костромской, Ярославской, Новгородской и Олонецкой губерний, Подольского уезда. Почти все имели духовное образование, учились в школе архиерейского дома, духовных, церковно-приходских училищах Твери и Старицы, но были и те, кто воспитывался в домашних условиях, посещал сельскую церковно-приходскую школу, гражданское народное городское училище. Согласно правилам, в монастырь принимали послушников в качестве пономарей, привратников, келейных, поваров, некоторые несли клиросное послушание, были также рясофорные и указные послушники. Со временем они рукополагались в иеродьяконы, иеромонахи, могли назначаться на должность казначея или ризничего.
Время от времени в Житенный монастырь переводили монахов из других обителей, и зачастую по собственному прошению, что, безусловно, говорит о большом уважении и почитании этой обители среди монашествующих.
Как и во многих других обителях, иноки и послушники Житенного монастыря нередко получали вознаграждение за хорошую службу в виде набедренника; в 1894 году наиболее почтенные монахи получили Серебряную медаль в память об императоре Александре III. Были награды, которые вручались по особым случаям. В 1918 году казначей монастыря иеромонах Нектарий, при отсутствии игумена Иосифа, был назначен временным управляющим, за что ко дню Пасхи был награжден наперсным крестом. Игумен, избранный заведующим лазаретом для раненых воинов на средства монастырей Твери, также за отличную и усердную службу Святым правительствующим Синодом был награжден крестом. По закрытии лазарета он вернулся обратно в монастырь, где и продолжил свое священослужение.
Однако среди монашествующих, бельцов и послушников были и случаи наказания за какой-либо проступок или неблаговидное поведение. Обычно, в зависимости от ситуации, на определенное время их лишали священослужения, ношения монашеского одеяния, братской трапезы, низводили в более низкий сан, отправляли в другой монастырь на исправление. К примеру, иеродьякон Афанасий был наказан за грубость и непочтительность к местному настоятелю, а так как послушание свое он не исправлял, епархиальным начальством было предписано отправить его в Ново-Соловецкий монастырь с запрещением священослужения под особый надзор настоятеля, в течение двух месяцев из братских доходов было предписано выдавать ему только половину положенной суммы.
Правда, иногда наказание для монахов назначалось в виде штрафа. Например, диакон Василий Карповский за пропуск в записи в метрику крестьянского брака и неисправное ведение исповедных росписей поплатился одним рублем в пользу вдов и сирот духовного звания.
Но все же стоит отметить, что такие наказания были нечасты, и в целом братия монастыря всегда послушно несла свои обязательства по священослужению, следовала положенному регламенту и придерживалась устава монастыря.
Что же касается настоятелей, то, как уже было отмечено, управление в Житенном монастыре было игуменское, а с 1766 года им присваивалось звание строителей. Из послужных списков настоятелей Житенного монастыря можно заключить, что в основном туда направлялись постриженики Тверского Архиерейского дома, Троицкого Селижаровского монастыря и Нило-Столобенской пустыни. Но игуменами становились и постриженики самой Житенной обители.
Согласно документам, настоятели довольно часто менялись, в среднем оставаясь на службе по пять-шесть лет, а порой и по два-три года. К примеру, почти все выходцы из Ниловой пустыни через некоторое время возвращались вновь на остров Столобное.
За всю историю обители лишь два настоятеля, Михаил и Феодорит, носили звание протоиеромонаха, которое Тверской архиепископ в XVIII веке присваивал только заслуженным иеромонахам монастырей. Строителю Михаилу (1784-1786), иеромонаху из Краснохолмского Николаевского Антоньева монастыря, по прошению осташковского городского головы Антона Дружинина и осташковского купечества, было разрешено во время духовных церемоний носить игуменский посох. Феодорит (1786-1789), определенный в строители Житенного монастыря, как говорилось в указе, «за честность жития и преосвященные труды», как и его предшественник, настоятель Михаил, пользовался тем же правом.
Жизнь обители на острове Житное протекала в соответствии с уставом монастыря; почитались православные традиции и бережно хранились святыни обители. Несмотря на частую смену монахов, послушников и игуменов, почти каждый из них по мере возможностей вложил свою лепту в развитие и процветание осташковского мужского Житенного монастыря.